基因组DNA用MseI酶切后,琼脂糖电泳为什么没有跑出弥散区?最近将基因组DNA用MseI来酶切,体系为20微升：genomicDNA（100ng/uL)5uL,10*Buffer2uL,MseI0.5uL),酶切65度3小时,但是用1%琼脂糖电泳,什么都没

Question

基因组DNA用Mse I酶切后,琼脂糖电泳为什么没有跑出弥散区?
最近将基因组DNA用MseI来酶切,体系为20微升：genomic DNA（100ng/uL) 5uL,10*Buffer 2uL,Mse I 0.5 uL),酶切65度3小时,但是用1%琼脂糖电泳,什么都没有跑出来,但是后续工作中,连接完Mse I接头 再用PCR后,就有了弥散区,大概在100-1000之间,请问这正常吗?酶切产物跑不出东西是什么原因,

Answer 1

大概是因为在你的酶切体系中DNA浓度比较低的缘故,不知道你电泳的上样量是多少,如果只是几ul,那肯定是跑不出来的.
如果样品比较多的话,你可以做个预实验：加大些DNA的量（3~5ug）,20ul体系酶切后全部用来上样跑电泳,应该就能看出酶切的效果了~
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详细资料请参考：on