2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平．下图为我国首例绿色荧光蛋白转基

Question

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平．下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）过程①必需用到的酶是______．
（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和______才能构成一个完整的基因表达载体．
（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是______．然后还要通过______技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上．
（4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方法，做______处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到______期即可通过显微操作将其细胞核去除．
（5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现．但应选择发育到______时期的早期胚胎进行操作，且要注意将内细胞团______，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．

Answer 1

（1）①过程表示获取目的基因，必需用到限制性核酸内切酶（限制酶），特点是能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（2）基因表达载体含有绿色荧光蛋白基因（目的基因），启动子、终止子和标记基因．
（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，一般采用显微注射技术；然后通过DNA分子杂交技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上．
（4）对母猪注射促性腺激素，使其超数排卵，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到减数分裂第二次分裂中期，再通过显微操作将其细胞核去除．
（5）通过胚胎分割技术获得多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，一般选择发育到桑椹胚或囊胚时期的早期胚胎进行操作，要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）  
（2）标记基因    
（3）显微注射技术   DNA分子杂交
（4）超数排卵   减数分裂第二次分裂中期         
（5）桑椹胚或囊胚    均等分割