如图所示组织型纤维酶原激活剂（tPA）的生产过程．二氢叶酸还原酶（DHFR）能催化二氢叶酸还原成四氢叶酸，缺少该酶的仓鼠卵巢细胞不能合成四氢叶酸，只能在添加胸苷、甘氨酸和嘌呤的

Question

如图所示组织型纤维酶原激活剂（tPA）的生产过程．二氢叶酸还原酶（DHFR）能催化二氢叶酸还原成四氢叶酸，缺少该酶的仓鼠卵巢细胞不能合成四氢叶酸，只能在添加胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长，转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长．叶酸的类似物氨甲喋呤存在时，可与叶酸竞争DHFR并抑制它的活性，使细胞死亡．当DHFR基因大量扩增并表达时，氨甲喋呤不足以结合全部的DHFR，细胞能在含有氨甲喋呤的培养基中存活．请回答：
（1）图中HindⅢ和EcoRⅠ示两种限制酶的酶切位点，将组织型纤维酶原激活剂（tPA）基因插入载体时，用HindⅢ和EcoRⅠ两种限制酶同时切______，与只使用EcoRⅠ一种限制酶相比，其优点是可以防止______．同时，在酶切的反应体系中加入______酶，即可得到______．
（2）已知HindⅢ酶的识别序列是AAGCTT，酶切位点在AA之间，请写出此酶切割后的粘性末端：______
（3）载体上的DHFR基因在基因工程中称为______，1号培养基中不应该加入______，2号培养基中应该加入______，1号和2号培养基在功能上属于______培养基．
（4）在2号培养基上存活的细胞还需进行______活性的检测，才能大规模培养以获得相应的产品．

Answer 1

（1）在切割目的基因和运载体时，一定要使用同一种限制性内切酶，这样，切出的切口才一样，才能进行碱基互补配对连接起来．两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来，形成重组质粒．只...