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产生平末端的PCR产物可以进行TA克隆吗对于用高保真TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物,如何进行克隆?还有PCR产物的T-vector克隆方法,应注意哪些操作环节?
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产生平末端的PCR产物可以进行TA克隆吗
对于用高保真TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物,如何进行克隆?还有PCR产物的T-vector克隆方法,应注意哪些操作环节?
对于用高保真TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物,如何进行克隆?还有PCR产物的T-vector克隆方法,应注意哪些操作环节?
▼优质解答
答案和解析
1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆;
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)
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