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我做出来的PCR产物跑胶能出现清晰地条带,为什么测序公司不能测序,说是信号中断,什么原因?
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我做出来的PCR产物跑胶能出现清晰地条带,为什么测序公司不能测序,说是信号中断,什么原因?
▼优质解答
答案和解析
原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应(测序反应本身也是PCR反应)二次聚合酶的打滑现象.原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失.出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的.
当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去.这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序.或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题.
当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去.这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序.或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题.
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