PCR技术介绍

Question

PCR技术介绍

Answer 1

PCR技术的基本原理
PCR技术由三个步骤反复的热循环构成:高温变性、低温退火和适温延伸.高温变性,在高温(95℃)条件下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；低温退火,在低温(37～55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；适温延伸,即在特异耐热酶-TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)时,引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成新的DNA链[1].新合成的DNA双链又可作为扩增模板,反复进行解链、退火、延伸三个步骤的热循环,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n 的指数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109 倍以上,实际上可达106 107 倍.
基于PCR技术的基本原理,多种新的应用模式应运而生,使PCR技术得到进一步的完善,出现了实时PCR (Real-time PCR )、原位PCR ( In site PCR )、反转录PCR (Reverse transcript PCR,RT-PCR )、标记PCR (Labelled Primers PCR,LP-PCR )、彩色PCR (Color Complementation Assay PCR,CCAPCR)、反向PCR (Reverse PCR)、不对称PCR (Asymmetric PCR)、重组PCR (Recombinant PCR) 免疫PCR ( Immuno - PCR)、多重PCR (Multiplex PCR)、膜PCR(membrane-bound PCR)等.这些新的技术使PCR技术具有更广的应用潜力.
1.1 PCR的要素
基本的PCR须具备：
1.要被复制的DNA模板 (Template)
2.界定复制范围两端的引物(Primers).3.DNA聚合酶 (Taq.Polymearse)
4.合成的原料及水.
PCR的反应包括三个主要步骤,分别是1).Denaturation 2).Annealing of primers,and 3).Extension of primers.所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性,将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板.而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端.最后在DNA聚合酶 (e.g.Taq-polymerase) 的作用下进行引物的延长 (Extension of primers)及另一股的合成.
参考文献：
[1 ]吴乃虎1基因工程原理(上) [ M ]1北京:科学技术出版社,20021
[2 ]郭新竹,宁正祥1PCR技术在食品检验中的应用[J ]1广州食品工业科技,2001 ,17 (2) :60～621
[ 3 ]卢圣栋主编1现代分子生物学实验技术[ M ]1高教育出版社,19931