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如表是几种限制梅识别序列及其切割位点,(图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中侧位点先同的酶不重复标注.请回答下列问题:限制酶BamHIBclISau3AIHindIII识别
题目详情
如表是几种限制梅识别序列及其切割位点,(图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中侧位点先同的酶不重复标注.请回答下列问题:
(1)图1中启动子是___识别和结合的部位.氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因作为标记基因,其作用是___.
(2)用图中质粒和目的基因构建重组DNA,应选用___两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过___作用后获得重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌时,先用___处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)一个基因表达载体的组成,除了图1中质粒所示结构外,还应具有___和目的基因.
(4)为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加___.若用Sau3k I切图质粒最多可能获得___种大小不同的DNA片段.如表是几种限制梅识别序列及其切割位点,(图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中侧位点先同的酶不重复标注.请回答下列问题:
(1)图1中启动子是___识别和结合的部位.氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因作为标记基因,其作用是___.
(2)用图中质粒和目的基因构建重组DNA,应选用___两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过___作用后获得重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌时,先用___处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)一个基因表达载体的组成,除了图1中质粒所示结构外,还应具有___和目的基因.
(4)为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加___.若用Sau3k I切图质粒最多可能获得___种大小不同的DNA片段.
限制酶 BamHI BclI Sau3A I HindIII 识别序列及切割位点 G1GATC C
C CTAG1G T1GATC A
A CTAG1T 1GATC
CTAG1 A1AGCT T
T TCGA1A 限制酶 BamHI BclI Sau3A I HindIII 限制酶 BamHI BclI Sau3A I HindIII 识别序列及切割位点 G1GATC C
C CTAG1G T1GATC A
A CTAG1T 1GATC
CTAG1 A1AGCT T
T TCGA1A 识别序列及切割位点 G1GATC C
C CTAG1G 1
1T1GATC A
A CTAG1T 1
11GATC
CTAG1 1
1A1AGCT T
T TCGA1A 1
1
限制酶 | BamHI | BclI | Sau3A I | HindIII |
识别序列及切割位点 | G1GATC C C CTAG1G | T1GATC A A CTAG1T | 1GATC CTAG1 | A1AGCT T T TCGA1A |
(1)图1中启动子是___识别和结合的部位.氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因作为标记基因,其作用是___.
(2)用图中质粒和目的基因构建重组DNA,应选用___两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过___作用后获得重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌时,先用___处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)一个基因表达载体的组成,除了图1中质粒所示结构外,还应具有___和目的基因.
(4)为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加___.若用Sau3k I切图质粒最多可能获得___种大小不同的DNA片段.如表是几种限制梅识别序列及其切割位点,(图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中侧位点先同的酶不重复标注.请回答下列问题:
限制酶 | BamHI | BclI | Sau3A I | HindIII |
识别序列及切割位点 | G1GATC C C CTAG1G | T1GATC A A CTAG1T | 1GATC CTAG1 | A1AGCT T T TCGA1A |
(1)图1中启动子是___识别和结合的部位.氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因作为标记基因,其作用是___.
(2)用图中质粒和目的基因构建重组DNA,应选用___两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过___作用后获得重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌时,先用___处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)一个基因表达载体的组成,除了图1中质粒所示结构外,还应具有___和目的基因.
(4)为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加___.若用Sau3k I切图质粒最多可能获得___种大小不同的DNA片段.
限制酶 | BamHI | BclI | Sau3A I | HindIII |
识别序列及切割位点 | G1GATC C C CTAG1G | T1GATC A A CTAG1T | 1GATC CTAG1 | A1AGCT T T TCGA1A |
C CTAG1G
A CTAG1T
CTAG1
T TCGA1A
C CTAG1G
A CTAG1T
CTAG1
T TCGA1A
C CTAG1G
1
A CTAG1T
1
CTAG1
1
T TCGA1A
1
▼优质解答
答案和解析
(1)启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位.标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(以便筛选出含有目的基因的细胞).
(2)目的基因两侧有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位点,若用限制酶BamHⅠ或Sau3A I切割会破坏质粒上两种抗性基因,因此用图中质粒和目的基因构建重组DNA时,应选用BclI和HindIII两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过DNA连接酶作用后获得重组质粒.将目的基因导入微生物细胞时常有感受态细胞法,即先用Ca2+2+(或CaCl22)处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)基因表达载体的组成除了图中的启动子、标记基因(抗生素抗性基因)外,还有终止子和目的基因.
(4)由于选用BclI和HindIII两种限制酶构建基因表达载体时,破坏了氨苄青霉素抗性基因,但没有破坏四环素抗性基因,因此切割构建为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加四环素.由于限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3k I识别,因此用Sau3k I切图质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段.
故答案为:
(1)RNA聚合酶 鉴别受体细胞中是否含有目的基因(以便筛选出含有目的基因的细胞)
(2)BclI和HindIII DNA连接酶 Ca2+2+(或CaCl22)
(3)终止子
(4)四环素 7
(2)目的基因两侧有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位点,若用限制酶BamHⅠ或Sau3A I切割会破坏质粒上两种抗性基因,因此用图中质粒和目的基因构建重组DNA时,应选用BclI和HindIII两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过DNA连接酶作用后获得重组质粒.将目的基因导入微生物细胞时常有感受态细胞法,即先用Ca2+2+(或CaCl22)处理细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(3)基因表达载体的组成除了图中的启动子、标记基因(抗生素抗性基因)外,还有终止子和目的基因.
(4)由于选用BclI和HindIII两种限制酶构建基因表达载体时,破坏了氨苄青霉素抗性基因,但没有破坏四环素抗性基因,因此切割构建为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,应在选择培养基中添加四环素.由于限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3k I识别,因此用Sau3k I切图质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段.
故答案为:
(1)RNA聚合酶 鉴别受体细胞中是否含有目的基因(以便筛选出含有目的基因的细胞)
(2)BclI和HindIII DNA连接酶 Ca2+2+(或CaCl22)
(3)终止子
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