tricine蛋白电泳(超低分子)染色后怎么没有条带呢?连Marker都看不到?实验好几次了,都以失败告终.样品是脱脂乳酶解后的水解液,之后冻干所得.

Question

tricine蛋白电泳(超低分子)染色后怎么没有条带呢?连Marker都看不到?实验好几次了,都以失败告终.
样品是脱脂乳酶解后的水解液,之后冻干所得.

Answer 1

胶的配方改进了么?
浓缩胶：1ml 含0.4% SDS的3M Tris-HCl,pH8.45
0.5ml 甲叉/双甲叉 （29：1）
2.5 ml ddH2O
4ul 40% AP
16ul TEMED
分离胶：2.4 ml 聚乙二醇
2ml 含0.4% SDS的3M Tris-HCl,pH8.45
3.6 ml 甲叉/双甲叉 （19：1）
4ul 40% AP
16ul TEMED
染色前必须固定：
先用ddH2O洗胶,然后用50ml 新鲜配的5%戊二醛去固定30min,再用水洗3X5min,再染色.固定后,小分子蛋白会染的比较好.
如果连Marker正常分子量大小的条带都看不到的话,你也得考虑染液的问题,因为即使没有固定,正常分子量大小的条带也应该能够染出来的.