马铃薯块茎含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发．图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答问题：（1）为获取抗盐基因，可以

Question

马铃薯块茎含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发．图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答问题：

（1）为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的___来合成cDNA．
（2）如图构建基因表达载体时，最好选用___酶切割含目的基因的外源DNA和质粒，不能使用Smal切割的原因是___．构建好的重组质粒在抗盐基因前要加上特殊的启动子，启动子是一段有特殊结构的___片段．
（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA上的原因是___．通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以___．
（4）如图转基因抗盐马铃薯培育过程中，属于脱分化阶段的是___（填序号）．从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是___．

Answer 1

（1）获取目的基因时，可以以mRNA为模板逆转录合成cDNA．
（2）用SamⅠ酶切割会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因，因此构建基因表达载体时不能用SamⅠ酶；因此，为了防止目的基因或质粒自身环化，在构建基因表达载体时，最好选用EcoRⅠ和HindⅢ酶切割含目的基因的外源DNA和质粒．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶结合的部位．
（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA上的原因是T-DNA是可以转移的DNA（T-DNA能携带目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上）．通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以稳定维持和表达．
（4）图中⑤属于脱分化阶段．从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地或较高浓度盐溶液中，观察是否能正常生长．
故答案为：
（1）mRNA
（2）EcoRⅠ和HindⅢSamⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因       DNA
（3）T-DNA是可以转移的DNA（T-DNA能携带目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上）       稳定维持和表达
（4）⑤将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地或较高浓度盐溶液中，观察是否能正常生长