某研究所根据植物“偏爱”的密码子设计，通过人工合成若干DNA片段，将其拼接成为人胰岛素基因，并将该基因置于CaMV35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下，通过农杆菌介导的方法

Question

某研究所根据植物“偏爱”的密码子设计，通过人工合成若干DNA片段，将其拼接成为人胰岛素基因，并将该基因置于CaMV35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下，通过农杆菌介导的方法转人番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素．并且在胰岛素一COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解．回答下列问题：
（1）该科研所使用的人胰岛素基因是采用___的方法获得．要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用___技术．该技术中使用的关键酶是___．
（2）根据上述描述，转基因操作时所用的载体是___，载体上的___可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．构建的基因表达载体中应含有的结构有CaMV35S启动子、终止子、复制原点、果实专一性启动子、___．
（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用___技术．该技术中使用的基因探针也可以用来检测___．
（4）吃这种转基因番茄不能治疗人类的I型糖尿病（由体内胰岛素分泌不足引起），从人体相关生理分析原因可能是___．

Answer 1

（1）根据题干信息“根据植物‘偏爱’的密码子设计，通过人工合成若干DNA片段，将其拼接成为人胰岛素基因，”可知，该科研所使用的人胰岛素基因是采用人工合成方法获得目的基因．PCR技术可以在体外大量扩增目的基因片段．该技术中使用的关键酶是热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）．
（2）根据上述描述，转基因操作时所用的载体是农杆菌的Ti质粒，载体上的T-DNA可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．构建的基因表达载体中应含有的结构有CaMV35S启动子、终止子、复制原点、果实专一性启动子、标记基因、目的基因．
（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用DNA分子杂交技术．该技术中使用的基因探针也可以用来检测目的基因是否转录出mRNA．
（4）由于胰岛素是蛋白质，易被消化道内蛋白酶水解成氨基酸，所以口服转基因番茄不能起到治疗的作用．
故答案为：
（1）人工合成       PCR       热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）
（2）农杆菌的Ti质粒       T-DNA        标记基因、目的基因 
（3）DNA分子杂交       目的基因是否转录出mRNA 
（4）胰岛素是蛋白质，易被消化道内蛋白酶水解成氨基酸，不能起到治疗的作用