血栓主要由不溶性的纤维蛋白等物质组成．纳豆激酶（NK）是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌产生的蛋白酶，它不但能直接作用于纤维蛋白（A过程），还能间接激活体内纤溶酶原（B过程）．

Question

血栓主要由不溶性的纤维蛋白等物质组成．纳豆激酶（NK）是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌产生的蛋白酶，它不但能直接作用于纤维蛋白（A过程），还能间接激活体内纤溶酶原（B过程）．如图是有关纳豆激酶溶栓机理简图，请据图回答问题：

（1）人们所需的纳豆激酶必需通过分离提纯才能获得，下面是分离提纯的步骤，其基本顺序是______．
①层析提纯  ②过滤   ③沉淀   ④破碎细胞  ⑤酶制剂  ⑥冷冻干燥
使酶蛋白沉淀通常采用改变pH或加入______．
（2）研究NK直接水解作用：给定纤维蛋白平板，将______滴加其上，若出现相应的溶解圈，则可说明______．
（3）NK 的间接作用是通过______激活体内纤溶酶原，增加纤溶酶的量和作用，溶解血栓．
（4）请根据下列给出的实验材料，比较NK与内源性纤溶酶溶栓效果，并在表格空白位置上，补全相应内容．
供选实验材料：NK溶液、内源性纤溶酶溶液、纤维蛋白块、蛋清溶液，缓冲液、双缩脲试剂、量筒、试管和秒表．
实验步骤：（“+”表示添加，“-”表示未添加）

	加入物质的成分	试管1	试管2
1	A______	+	+
2	缓冲液	+	+
3	纳豆激酶（NK）溶液	+	-
4	B______	-	+

2格中A处添加的物质是______，B处添加的物质是______．
②实验结果的鉴定所用的观察方法是______．

Answer 1

（1）由题意知，纳豆激酶（NK）是由纳豆菌产生的蛋白酶，因此纳豆激酶分离提纯的过程是先破碎细胞释放纳豆激酶，然后经过过滤、沉淀，层析提纯，再通过冷冻干燥获得酶制剂；使酶蛋白沉淀的常用方法是改变PH或加入硫酸铵．
（2）分析题图可知，纳豆激酶（NK）能直接作用于纤维蛋白，使纤维蛋白降解；将纳豆激酶（或NK）滴加在给定纤维蛋白平板上，可以检验纳豆激酶（NK）直接降解纤维蛋白的作用，如果现相应的溶解圈，说明NK对纤维蛋白有直接水解作用或降解作用（NK在体外有溶栓效果）．
（3）分析题图可知，纳豆激酶（或NK）可以刺激血管上皮细胞，使血管上皮细胞释放组织纤溶酶原激活剂激活体内纤溶酶原，增加纤溶酶的量和作用，溶解血栓．
（4）①分析题干信息可知，该实验的目的是比较NK与内源性纤溶酶溶栓效果，因此实验的自变量是酶的种类，因变量是纤维蛋白块的消失的时间，其他如试验用的纤维蛋白块大小、缓冲液的浓度和体积、酶的浓度和体积属于无关变量，无关变量应该保持一致．，因此A处加入的物质应该是纤维蛋白块，B加入的物质是内源性纤溶酶溶液．
②通过比较蛋白块消失的时间的长短比较NK与内源性纤溶酶溶栓效果．
故答案为：
（1）④②③①⑥⑤硫酸铵
（2）纳豆激酶（或NK）       NK对纤维蛋白有直接水解作用或降解作用（NK在体外有溶栓效果）
（3）刺激血管上皮细胞，释放组织纤溶酶原激活剂
（4）①纤维蛋白块、内源性纤溶酶溶液   
 ②观察记录蛋白块消失的时间