PCR体系怎么配PCRwasperformedinareactionvolumeof25llcontainingPCRreactionbuffer(50mMKCl,10mMTris-HCl,2.5mMMgCl2,pH8.3),200μMdNTPs,0.2μMinvAprimers,0.2μMsefAprimers,and0.5μMpefAprimers,2.5UofTaqDNApoly

Question

PCR体系怎么配
PCR was performed in a reaction volume of 25 ll containing PCR reaction buffer (50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, 2.5 mMMgCl2, pH 8.3), 200μMdNTPs, 0.2 μM invA primers, 0.2μM sefA primers, and 0.5 μM pefA primers,2.5U of Taq DNA polymerase (MBI Fermentas), and 0.2μl of DNA template.
这段话怎么翻译啊,这个PCR体系中的10*buffer、dNTP、引物invA、sefA及pefA的体积各是多少,怎么算的啊

Answer 1

在25ul的反应体系中配置,PCR Buffer(组成：50 mM KCl,10 mM Tris-HCl,2.5 mMMgCl2,pH 8.3),
200μM dNTPs(200μM是指25ul体系中的dNTPs的终浓度,下面一样),
0.2 μM invA primers,-----0.2 μM终浓度的配对链引物(即上游引物)
0.2μM sefA primers,-----0.2 μM终浓度的自身链引物(即下游引物)
and 0.5 μM pefA primers,这个不是很清楚,估计是探针的意思
2.5U of Taq DNA polymerase -------2.5U的Taq酶,一般Taq酶都是5U/ul的,所以具体加几微升就要看你买的Taq酶的浓度了,(MBI Fermentas),-----是一家公司的名字
and 0.2μl of DNA template.------0.2ul DNA模板
再加一句,剩余的体积用无菌水补足25ul