PCR目的片段为2100BP到3000BP,用哪种酶效果会好点?还有就是上游引物的TM为48.9,下游引物为53.请问退火温度设定什么值较好?

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PCR目的片段为2100BP到3000BP,用哪种酶效果会好点?
还有就是上游引物的TM为48.9,下游引物为53.请问退火温度设定什么值较好?

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答案和解析

引物计算的Tm值未必适合你的PCR仪,还是要用梯度来一遍,不过如果懒得弄,你就用52度P一次也行.置于哪种酶,我一般要是扩增2000-3000这个长度,就是Taq足矣,我们实验室的Taq是自己做的,因此图便宜都用Taq,也没见什么不良影响.至于Pfu,保真性高一些,可是扩增效率低一点,如果你扩增这个片段用于后续克隆,不能出错,Pfu也挺好,但是你如果仅仅是扩增这个片段为了验证什么别的结果,那么Taq这种便宜量又足的东东,非常合适.

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